细胞组分的分离和纯化：

一、细胞裂解：

基本原则：裂解液加入渗透压维持剂、蛋白酶抑制剂

物理方法：避免损伤亚细胞结构

去垢剂：能干扰疏水作用并破坏脂双层，从而分离膜内在蛋白

• 离子型：细胞裂解充分，易使蛋白变性，影响蛋白等电点，不用于双向电泳样品制备，如阴离子去垢剂十二烷基磺酸钠（SDS）。十二烷基磺酸钠(SDS)为常用的离子型去垢剂，它是两亲性的脂质样分子，有一个带电的亲水区和一个疏水区（烃链）。当用高浓度的去垢剂与膜混合时，去垢剂分子的疏水区替代磷脂分子与穿膜蛋白的疏水区结合，也与磷脂分子的疏水尾部结合，由此把穿膜蛋白与磷脂分开。由于SDS的极性端带电荷（离子型）更易溶于水，所以形成了去垢剂一蛋白质复合物进入溶液中而将膜蛋白分离出来。蛋白质经分离、纯化后，就可以用多种手段进行分析，确定其相对分子量、氨基酸组成、氨基酸序列等。 SDS对蛋白质的作用较强烈，能使蛋白质解折叠引起变性，不利于对其进行功能研究。为获得有功能的膜蛋白，可采用非离子型去垢剂。
• 非离子型：裂解不彻底，适当浓度可以选择性抽提细胞质蛋白，如TritonX-100、NP-40
• 兼性离子型：CHAPS

离液剂：易使蛋白、膜脂变形，常用于无需保持蛋白活性、DNA和RNA的抽提，如尿素、盐酸胍、异硫氰酸胍

二、细胞器和细胞组分的分级分离：

1. 差速离心法：是基础，分离大小显著不同
   1. 低速：沉淀含有整个细胞、细胞核和细胞骨架
   2. 中速：沉淀含有线粒体、溶酶体和过氧化物酶体
   3. 高速：沉淀含有微粒体和小泡
   4. 超速：沉淀含有核糖体病毒大分子
2. 速度沉降：更精细分离。不同组分的沉降速率取决于它们的大小与形状，通常用沉降系数(S)值表示。
3. 平衡沉降：取决于细胞成分的浮力密度，与大小形状无关。

三、蛋白质的分离与鉴定：

1. 层析：纯化，不同的蛋白质因与颗粒相互作用的不同而被不同程度地滞留
2. 电泳：分析和鉴定，蛋白质分子按照净电荷多少、大小及形状的不同在电场中移动

四、核酸的分离纯化与鉴定：

1. 差速离心：分离纯化
2. 凝胶电泳：分离鉴定